陈曦1, 2,张小龙1, 2,杨雨桐 1,2,王昱杰1,2,童奕1,2,袁泉3,4,李名友1, 2,周文宗3,4,*,张庆华1, 2,*
干扰素调节因子(Interferon regulatory factors,IRF) 是一类调控干扰素表达的转录调节因子家族,具有抗病毒、抗细菌、调节免疫基因表达、调节细胞生长和凋亡等相关作用,IRF9是IRFs家族重要成员之一。IRF9可与STAT通路结合发挥抗病毒作用, 但在合鳃鱼类中有关IRF9抗细菌的功能和机制研究相对匮乏。为此,本文以黄鳝为研究对象,采用了PCR、Western blot、免疫荧光、双荧光素酶报告基因实验,检测了MaIRF9的分子量和亚细胞定位,并对健康黄鳝以及嗜水气单胞菌攻毒的黄鳝进行了组织表达检测,明确了MaIRF9可以参与机体抗细菌免疫的功能,对MaIRF9参与抗细菌免疫的机制进行了初步探究。结果显示:Mairf9 CDS全长1290 bp,编码429个氨基酸,蛋白大小为48.46 kDa,理论等电点为7.23。多重序列对比显示,点带石斑鱼IRF9、大黄鱼IRF9、日本鲭IRF9与黄鳝IRF9亲缘关系较近。RT-qPCR结果显示,IRF9在黄鳝组织内有广泛表达。使用嗜水气单胞菌进行攻毒之后,在检测的肝、脾、肾、脑、心、肌肉、性腺和后肠八个组织中,除肝之外,Mairf9均在不同时间段内上调,证明其参与了黄鳝对嗜水气单胞菌感染的免疫过程。免疫荧光结果显示MaIRF9为细胞核蛋白,能与细胞核共定位,表明其为细胞核蛋白。双荧光素酶报告基因结果显示MaIRF9会通过上调NF-κB通路来抵抗嗜水气单胞菌的感染。本研究对于理解黄鳝IRF9的蛋白序列信息和特性具有重要意义,初步揭示了其抗菌机制,为后续的抗病研究奠定了基础,具有重要的理论指导意义。