董世娟1,2,石明明1,2*,朱于敏1,2,于瑞嵩1,2,张源淑3,夏 东1,李 震1,2**
2015,31(1): 11-16.
利用DNAStar软件对GeneBank中登录的猪流行性腹泻病毒(PEDV) M基因序列进行分析,选择保守区域设计合成引物和探针,制备M基因重组质粒标准品,建立检测PEDV的TaqMan荧光定量PCR方法,并验证其敏感性、特异性及重复性。结果建立的定量标准曲线Ct值和模板起始拷贝数对数在108-101copies/μL有良好的线性关系,相关系数为0.997,该方法可检测到初始模板中6.368 copies/μL的质粒DNA;应用本法检测49份临床样品,其阳性率达98%,比普通RT-PCR方法检测的阳性率高18%。研究表明,建立的PEDV TaqMan荧光定量PCR检测方法具有较好的灵敏性、特异性和重复性,适用于临床样本中PEDV的快速检测,为PEDV的感染和增殖规律的研究奠定了基础。