杨 奇1, 2,韩芳婷1, 3,刘启文1, 3,蒋玲曦1, 4,谭芙蓉1, 4,
吴 潇1, 4,赵 凯1, 4,王金斌1, 4,唐雪明1, 4*
2013,29(5): 10-14.
通过PCR方法从克隆载体上扩增转基因水稻中的抗虫基因cry2A,经限制性内切酶EcoR I和BamH I双酶切定向插入到原核表达载体pET-30a(+)中,成功构建了蛋白表达载体pET-30a(+)/Cry2A, 并转入大肠杆菌BL21(DE3)中进行诱导表达。通过对其表达条件进行优化,发现在IPTG浓度为0.4 mmol/L、诱导时间为6 h、诱导温度为30℃的表达条件下,目的蛋白表达量最高,大部分以包涵体形式表达。将包涵体裂解并用Ni-NTA亲和柱纯化,所得纯化蛋白在复性缓冲液中复性,最终得到有活性的高纯度目的蛋白。